Sasuke est un ninja du village de Konoha au caractère relativement calme, discret et froid. Il doit faire équipe avec Naruto Uzumaki, avec qui il entretient vite une relation de rivalité et d'amitié à la fois, et Sakura Haruno, qu'il détestait au début mais qui au fur et a mesure va devenir une amie. Tous trois apprennent les arts ninja sous l'autorité de Kakashi Hatake.

Sasuke possède une technique d'œil innée, le Sharingan. Ce dernier lui permet d'anticiper et de copier les mouvements et les coups de ses adversaires. Il est aussi très bon technicien de Taijutsu, et possède un excellent sens tactique.

Froid, distant et détaché, son seul objectif est de venger sa famille de son grand frère Itachi Uchiwa, qui a exterminé son Clan, sa propre famille, alors que Sasuke n'était encore qu'un enfant, soi-disant pour "évaluer son potentiel".

La raison véritable du massacre est que le clan était sur le point de faire un coup d'état auquel Itachi était opposé. Désireux de maintenir la paix entre son clan et son village, le jeune homme joue les agents-doubles au profit du Conseil de Konoha et de l'Hokage. Arrivé à un point où d'éventuelles négociations ne pouvaient plus calmer les deux partis en présence, ces derniers ordonnent à Itachi d'exterminer les membres de son clan. Seul le petit Sasuke sera épargné, à la demande express de son grand frère.